Lysistrata es el personaje principal de la obra, una mujer fuerte a la que se le ocurre un plan para evitar que la guerra siga destruyendo su país y matando a sus hombres. Ella diseña un plan mediante el cual las mujeres rechazarán el sexo con sus maridos como una forma de convencerlos de que detengan la guerra. Ella es una líder dinámica, apasionada y persuasiva, que logra que todas las mujeres estén de acuerdo con su plan para promulgar una verdadera protesta política y un cambio.
Al igual que en otras tragedias griegas, hay un coro. En LisístrataEn el caso de los coros, hay dos coros: el coro de hombres y el coro de mujeres. El coro de hombres agrega un alivio cómico a la obra, ya que a menudo son acosados y molestados por las mujeres en sus vidas. Se creen fuertes y capaces de controlar el mundo, pero les cuesta mucho hacerlo.
El coro de mujeres puede enfrentarse a los hombres y tomar la delantera en muchos puntos de la obra. Se maravillan de las habilidades organizativas de Lysistrata y animan a los personajes femeninos más jóvenes a seguir adelante con su plan para negar el sexo a los hombres.
Calonice es una de las vecinas de Lisístrata y la primera en llegar a la reunión organizada por Lisístrata en la primera escena. Está muy motivada para ayudar con el plan de Lysistrata y está a cargo de organizar a las mujeres para la reunión. Ella pronuncia el juramento que las mujeres recitan antes de beber vino juntas.
Myrrhina es una joven matrona de las afueras de la ciudad. Ella es la primera en llegar con otro grupo de mujeres. Ella corteja a su esposo, Cinesias, pero retrasa el sexo, volviéndolo loco, en la cuarta escena de la obra.
Lampito es una mujer espartana que es muy grande, con pechos gigantes y una forma bastante simple de hablar (una broma en la obra es que los ciudadanos espartanos son grandes y tontos). Ella está de acuerdo con el plan de Lysistrata y su participación es clave para su éxito.
El esposo de Myrrhina es un general que está particularmente abrumado por su deseo sexual, aunque su esposa se lo niega. Viene a la Acrópolis para rogarle a su esposa que regrese a casa y cumpla con sus deberes como esposa. Es un general lujurioso que aparece casi exclusivamente en el escenario con una erección.